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      新聞詳情

      裸鼠成瘤實驗技巧

      日期:2022-05-20 05:57
      瀏覽次數:217
      摘要: 裸鼠成瘤實驗技巧 實驗室常用的是BALB/c-nu裸小鼠 ,隨著裸小鼠年齡增長或有關因素的影響(如病毒感染),裸鼠體內正常T細胞會增加,故接種腫瘤實驗一般采用4--6周齡的裸鼠。 裸鼠成瘤實驗技巧 1、細胞的狀態是成瘤實驗的關鍵,所以細胞生長狀態一定要好,取處于對數生長期的細胞,細胞達80-90%左右密度為宜。收集細胞前**晚上更換新鮮培養基。 2、胰酶消化細胞后用預冷的PBS洗兩遍,目的為去除細胞中殘余的血清。 3、用PBS或者無血清培養基吹打細胞沉淀至合適的...

      裸鼠成瘤實驗技巧

      實驗室常用的是BALB/c-nu裸小鼠 ,隨著裸小鼠年齡增長或有關因素的影響(如病毒感染),裸鼠體內正常T細胞會增加,故接種腫瘤實驗一般采用4--6周齡的裸鼠。


      裸鼠成瘤實驗技巧

      1、細胞的狀態是成瘤實驗的關鍵,所以細胞生長狀態一定要好,取處于對數生長期的細胞,細胞達80-90%左右密度為宜。收集細胞前**晚上更換新鮮培養基。

      2、胰酶消化細胞后用預冷的PBS洗兩遍,目的為去除細胞中殘余的血清。

      3、用PBS或者無血清培養基吹打細胞沉淀至合適的濃度,一般皮下瘤接種的細胞量為1-5×10^6個細胞/支,接種體積為0.1-0.2ml,因此細胞懸液的濃度為1-5×10^7個細胞/ml,如若有條件的實驗室,也可以加基質膠以加速瘤塊的生成,基質膠與PBS或無血清的比列為1:1。

      4、細胞消化后應盡快接種到裸鼠皮下,一般盡量在半小時內完成(如果接種量大,可以分批接種),途中將細胞懸液放在冰上降低細胞的代謝以保持細胞的活性。

      5、選擇的裸鼠一般在4-6周齡,體重16-18g左右,種植部位選擇血供豐富區域,如腋窩中后部。

      6、接種前用槍將細胞懸液充分的吹散,防止細胞成團而降低細胞成活率,并且導致小鼠接種細胞數量的差異過大。

      7、接種時,針頭在皮下進針深一點,約1cm深,針頭在皮下左右滑動幾次,以便細胞接種成團,減少注射后細胞懸液從針眼溢出。

      8、如何保定裸鼠?左手拇指和食指捏緊裸鼠頸背部皮膚,小拇指夾住裸鼠尾巴。

      9、接種后1-2周左右可以見到皮下開始出現腫塊。

      10、根據腫瘤細胞的特性和接種細胞的量,一般皮下成瘤的周期為1-2個月。腫瘤不宜生長過大,一般不要超過2000mm3。

      11、腫瘤大小測量一般為1周兩次,游標卡尺測量腫瘤*長和*短部位。V=1/2*a*b2 (a為長軸,b為短軸)。

      12、皮下瘤取下后一部分凍液氮用作以后提蛋白和RNA,一部分福爾馬林固定用做免疫組化、免疫熒光等。


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